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题文
(附加题)下图为制备纤维素酶的流程图。请分析回答相关问题。
(1)在筛选纤维素分解菌的过程中,可以在特定的培养基中添加_____________染料,根据是否产生________来进行筛选。在菌体培养过程中,为确保培养菌体的单一性,菌体培养过程最关键的是___________。
(2)透析时,常用的透析液为________。经透析后获得的含酶的粗提取液是透析袋_______(内或外)的溶液。
(3)纯化蛋白质常用的方法有_______、_______等。
(4)研究表明,不同来源的纤维素酶,虽然酶的浓度相同,但活性不同。若不考虑酶的最适pH和最适温度的差异,其可能的原因是_____________。
(5)在生产实践中,纤维素酶还可用于解决能源问题,具体的用途为______________。
题型:读图填空题难度:中档来源:模拟题
答案
(1)刚果红     透明圈     无菌操作
(2)20mmol/L的磷酸缓冲液     内
(3)凝胶色谱法     电泳法
(4)不同酶的氨基酸序列不同(不同酶的空间结构不同)
(5)催化纤维素分解为葡萄糖,用作制取酒精的原料
据魔方格专家权威分析,试题“(附加题)下图为制备纤维素酶的流程图。请分析回答相关问题。(1)在..”主要考查你对  酶的制备和活力的测定分解纤维素的微生物的分离  等考点的理解。关于这些考点的“档案”如下:
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酶的制备和活力的测定分解纤维素的微生物的分离
考点名称:酶的制备和活力的测定
  • 酶的制备和活力的测定:

    酶活力(enzymeactivity):也称为酶活性,是指酶在催化一定的化学反应时表现出来的能力,通常用酶促反应的速率即酶促反应过程中单位时间内底物的减少量或产物的生成量来表示。酶活力的高低会受温度、pH、激活剂等多种因素的影响。酶的提取一般选择在低温和适合的pH下进行,有时还要加入酶的激活剂以提高酶活力。例如,从植物材料中提取果胶酶就是在低温、偏酸性的提取液和NaCl作激活剂的条件下进行的。
    一、制备果胶酶
    1、实验材料和器具:新鲜的水果或蔬菜;质量分数为10%的NaCl溶液,0.1mol/L冰醋酸;研钵,剪刀,漏斗,纱布或滤纸,烧杯,精密pH试纸,试管,酒精灯,离心机,榨汁机等。
    2、果胶酶的制备:
    (1)将50g新鲜的水果或蔬菜洗净,在预冷的研钵内用剪刀迅速剪碎后研磨,边研磨边加入质量分数为10%NaCl溶液50mL,制成匀浆。
    (2)漏斗中放置滤纸或5层纱布过滤匀浆液,收集滤液。
    (3)以4000r/min的离心速率离心滤液15min。注意使用同一规格的离心管,离心管内滤液的高度不超过离心管长度的2/3,离心前要确保在离心机中对称放置的离心管(内含滤液)的质量相等。(4)离心完毕后,果胶酶主要存在于离心管的上清液中,迅速地将上清液倒入洁净的小烧杯内,用0.1mol/L冰醋酸将pH调至3~4,在0~4℃下保存备用。
    二、观察果胶酶对苹果匀浆液的作用
    1、用榨汁机制作苹果匀浆液,将匀浆液置于90℃的恒温水浴中保温4min。冷却后再过滤,收集滤液。
    2、取两支试管,编号为1和2,分别加入30mL滤液,再向试管1中加入30mL保存备用的上清液,向试管2中加入经过90℃水浴保温4min后的上清液30mL,振荡摇匀两支试管,置于室温下。
    3、观察两支试管中苹果匀浆液的澄清程度变化,并将结果记录在下表中。

    项目

    苹果匀浆液/mL

    上清液/mL

    90℃水浴保温4min后的上清液/mL

    现象

    澄清时间

    试管1 (样品管)

    30

    30

    试管2 (对照管)

    30

    30

  • 知识点拨:

    注意事项:
    在温度、pH影响酶活性的实验中,始终都贯穿着对照原则,而在设置对照实验时最重要的是运用单一变量原则,其中的变量就是我们所研究的对象,所以在分析实验问题时,要紧紧抓住研究变量,把其他可能影响实验结果的变量变为常量,才能保证对照实验结果的严密性和准确性。对于温度对酶活性影响的关系曲线,在低于最适温度时,活性受温度影响比高于最适温度时的小。
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